PBS o tamponata con fosfato è salino una soluzione tampone questo è particolarmente prezioso perché imita la concentrazione di ioni, l'osmolarità e il pH dei fluidi del corpo umano. In altre parole, è isotonico rispetto alle soluzioni umane, quindi è meno probabile che provochi danni alle cellule, tossicità o precipitazioni indesiderate nella ricerca biologica, medica o biochimica.
Composizione chimica in PBS
Esistono diverse ricette per preparare la soluzione PBS. La soluzione essenziale contiene acqua, sodio idrogeno fosfato e cloruro di sodio. Alcuni preparati contengono cloruro di potassio e diidrogeno fosfato di potassio. L'EDTA può anche essere aggiunto nella preparazione cellulare per prevenire l'aggregazione.
La soluzione salina tamponata con fosfato non è l'ideale per l'uso in soluzioni che contengono cationi bivalenti (Fe2+, Zn2+) perché possono verificarsi precipitazioni. Tuttavia, alcune soluzioni di PBS contengono calcio o magnesio. Inoltre, tenere presente che il fosfato può inibire le reazioni enzimatiche. Prestare particolare attenzione a questo potenziale svantaggio quando si lavora con il DNA. Sebbene la PBS sia eccellente per la scienza fisiologica, tenere presente che il fosfato in un campione tamponato con PBS può precipitare se il campione viene miscelato con etanolo.
Una composizione chimica tipica di 1X PBS ha una concentrazione finale di 10 mM PO43−, 137 mM NaCl e 2,7 mM KCl. Ecco la concentrazione finale di reagenti nella soluzione:
| sale | Concentrazione (mmol / L) | Concentrazione (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| N / A2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Protocollo per la preparazione di soluzione salina tamponata con fosfato
A seconda del tuo scopo, puoi preparare PBS 1X, 5X o 10X. Molte persone acquistano semplicemente compresse tampone PBS, le dissolvono in acqua distillata e regolano il pH secondo necessità con acido cloridrico o idrossido di sodio. Tuttavia, è facile creare la soluzione da zero. Ecco le ricette per la soluzione salina tamponata con fosfato 1X e 10X:
Reagente |
Quantità aggiungere (1 ×) |
Concentrazione finale (1 ×) |
Importo da aggiungere (10 ×) |
Concentrazione finale (10 ×) |
| NaCl | 8 g |
137 mM | 80 g |
1,37 M |
| KCl | 0,2 g |
2.7 mM | 2 g |
27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g |
10 mM | 14,4 g |
100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g |
1,8 mM | 2,4 g |
18 mM |
Opzionale: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g |
1 mM | 1,33 g |
10 mM |
MgCl2 • 6H2O |
0,10 g | 0,5 mM |
1,0 g | 5 mM |
- Sciogliere i sali di reagente in 800 ml di acqua distillata.
- Regolare il pH al livello desiderato con acido cloridrico. Di solito questo è 7.4 o 7.2. Utilizzare un pHmetro per misurare il pH, non la carta pH o altre tecniche imprecise.
- Aggiungi acqua distillata per ottenere un volume finale di 1 litro.
Sterilizzazione e conservazione della soluzione PBS
La sterilizzazione non è necessaria per alcune applicazioni, ma se la si sta sterilizzando, dispensare la soluzione in aliquote e autoclavare per 20 minuti a 15 psi (1,05 kg / cm2) o utilizzare la sterilizzazione del filtro.
Può essere una soluzione salina tamponata con fosfato conservato a temperatura ambiente. Può anche essere refrigerato, ma la soluzione 5X e 10X può precipitare quando raffreddato. Se devi raffreddare una soluzione concentrata, prima conservala a temperatura ambiente fino a quando non sei sicuro che i sali si siano completamente dissolti. Se si verificano precipitazioni, il riscaldamento della temperatura li riporterà in soluzione. La durata di conservazione della soluzione refrigerata è di 1 mese.
Diluizione di una soluzione 10X per ottenere 1X PBS
10X è una soluzione concentrata o di riserva, che può essere diluita per ottenere una soluzione 1X o normale. Una soluzione 5X deve essere diluita 5 volte per effettuare una diluizione normale, mentre una soluzione 10X deve essere diluita 10 volte.
Per preparare una soluzione di lavoro da 1 litro di PBS 1X da una soluzione PBS 10X, aggiungere 100 ml della soluzione 10X a 900 ml di acqua. Ciò modifica solo la concentrazione della soluzione, non la quantità in grammi o molare dei reagenti. Il pH non dovrebbe essere influenzato.
PBS contro DPBS
Un'altra soluzione tampone popolare è la soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco o DPBS. DPBS, come PBS, viene utilizzato per la ricerca biologica e buffer nel range di pH compreso tra 7,2 e 7,6. Può essere conservato a temperatura ambiente. La soluzione di Dulbecco contiene una concentrazione inferiore di fosfato. Si tratta di ioni fosfato 8,1 mM mM, mentre la PBS normale è di fosfato 10 mM. La ricetta per 1x DPBS è:
| Reagente | Importo da aggiungere (1x) |
| NaCl | 8.007 g |
| KCl | 0,201 g |
| N / A2HPO4 | 1.150 g |
| KH2PO4 | 0,200 g |
| Opzionale: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
Sciogliere i sali in 800 mL di acqua. Regolare il pH da 7,2 a 76 usando acido cloridrico. Regola il volume finale a 1000 ml con acqua. Autoclave a 121 ° C per 20 minuti.
fonti
- Dulbecco, R.; et al. (1954). "Formazione di placca e isolamento di linee pure con virus della poliomielite". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
- "Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Pressa da laboratorio Cold Spring Harbor.