Il tampone TAE è una soluzione composta da base Tris, acido acetico ed EDTA (Tris-acetato-EDTA). È storicamente il tampone più comune utilizzato per il gel di agarosio elettroforesi nelle analisi dei prodotti a base di DNA risultanti PCR amplificazione, DNA protocolli di purificazione o Clonazione del DNA esperimenti.
Questo buffer ha una bassa forza ionica e una bassa capacità di buffering. È più adatto all'elettroforesi di grandi pezzi (> 20 kilobasi) di DNA e dovrà essere sostituito frequentemente o ricircolato per tempi di esecuzione del gel più lunghi (> 4 ore). Con questo in mente, potresti prendere in considerazione l'idea di creare diversi batch del buffer.
Dato che il buffer è facile da eseguire e le fasi possono essere eseguite rapidamente, la creazione di più di un batch alla volta non dovrebbe richiedere molto tempo o essere difficile. Utilizzando le istruzioni di seguito, dovrebbero essere necessari solo 30 minuti per creare il buffer TAE.
Cosa serve per il buffer TAE
Poiché la creazione del buffer TAE richiede solo un set rapido e semplice di istruzioni, il numero di materiali necessari per esso non è eccessivo. Avrai solo bisogno di sale disodico EDTA (acido etilendiamminotetraacetico), base di Tris e acido acetico glaciale.
La realizzazione del buffer richiede inoltre un pHmetro e standard di calibrazione, a seconda dei casi. Avrai anche bisogno di becher o boccette da 600 ml e 1500 millilitri e cilindri graduati. Infine, avrai bisogno di acqua deionizzata, mescolare le barre e mescolare le piastre.
Nelle seguenti istruzioni, il peso della formula (la massa atomica di ciascun elemento viene moltiplicata per il numero di atomi, quindi la massa di ciascuno viene sommata) viene abbreviata come FW.
Preparare una soluzione madre di EDTA
Una soluzione EDTA viene preparata in anticipo. L'EDTA non andrà completamente in una soluzione fino a quando il pH non sarà regolato a circa 8,0. Per uno stock da 500 millilitri soluzione di 0,5 M (molarità o concentrazione) di EDTA, pesare 93,05 grammi di sale disodico EDTA (FW = 372,2). Scioglierlo in acqua deionizzata da 400 millilitri e regolare il pH con idrossido di sodio (NaOH). Rabboccare la soluzione fino a un volume finale di 500 millilitri.
Crea la tua soluzione stock
Prepara una soluzione madre concentrata (50x) di TAE pesando 242 grammi di base Tris (FW = 121,14) e sciogliendola in circa 750 millilitri di acqua deionizzata. Aggiungere con cautela 57,1 millilitri di acido glaciale e 100 millilitri di 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Successivamente, regola la soluzione su un volume finale di 1 litro. Questa soluzione madre può essere conservata a temperatura ambiente. Il pH di questo tampone non è regolato e dovrebbe essere di circa 8,5.
Preparare una soluzione di lavoro del buffer TAE
La soluzione di lavoro di 1x tampone TAE viene prodotta semplicemente diluendo la soluzione madre di 50 volte in acqua deionizzata. Le concentrazioni finali di soluto sono 40 mM (millimolare) di tris-acetato e 1 mM di EDTA. Il tampone è ora pronto per l'uso nell'esecuzione di un gel di agarosio.
Avvolgendo
Controllare l'inventario prima di iniziare per assicurarsi di disporre di tutti i materiali sopra indicati per il buffer TAE. Il personale addetto alle forniture dovrebbe essere in grado di dirti se dispone di tutti gli articoli di cui hai bisogno in magazzino. Non vuoi finire per perdere qualcosa nel mezzo della procedura.