Il polimorfismo della lunghezza del frammento di restrizione (RFLP) è un metodo molecolare di analisi genetica che consente agli individui di essere identificati in base a modelli unici di enzima di restrizione tagliando in specifiche regioni del DNA.
Chiamato anche Analisi RFLP, la tecnica sfrutta il vantaggio di polimorfismi nei codici genetici delle singole persone. Anche se tutti i membri di una specie hanno essenzialmente la stessa composizione genetica, queste lievi differenze spiegano le variazioni nel fenotipo, come l'aspetto o il metabolismo, tra gli individui.
Tecnica di analisi RFLP
La tecnica di analisi RFLP prevede il taglio di una particolare regione di DNA con variabilità nota, con enzimi di restrizione, quindi separando i frammenti di DNA mediante elettroforesi su gel di agarosio e determinando il numero di frammenti e dimensioni relative.
Un enzima di restrizione è un enzima, una molecola proteica, che taglia il DNA nei siti di restrizione. In sostanza, il campione di DNA viene scomposto e digerito dagli enzimi di restrizione. I frammenti risultanti vengono separati in base alla loro lunghezza e il modello delle dimensioni dei frammenti differirà per ogni singolo testato.
L'intero processo RFLP richiede l'etichettatura della sonda, la frammentazione del DNA, l'elettroforesi, il blotting, l'ibridazione, il lavaggio e l'autoradiografia. La RFLP rilevata viene visualizzata usando una radiografia in autoradiografia, dove i frammenti di DNA possono essere visualizzati e analizzati dopo essere stati separati l'uno dall'altro mediante elettroforesi.
Domanda di utilizzo RFLP
Alcune delle applicazioni per l'analisi RFLP includono:
- DNA impronte digitali: Gli scienziati forensi possono utilizzare l'analisi RFLP per identificare i sospetti sulla base di prove raccolte su scene di crimini.
- Paternità: RFLP è anche usato nella determinazione della paternità o per tracciare origini.
- Diversità genetica: La tecnica può essere utilizzata per studiare l'evoluzione e la migrazione della fauna selvatica, studiare i modelli di allevamento nelle popolazioni animali e rilevare e diagnosticare determinate malattie.
La tecnica di utilizzo del rilevamento RFLP della variazione nei genomi è uno strumento vitale nella mappatura del genoma e nell'analisi delle malattie genetiche. Se la posizione di un particolare gene della malattia viene ricercata in un determinato cromosoma, i ricercatori lo farebbero analizzare il DNA dei membri di una famiglia con la malattia, quindi cercare modelli simili di ereditarietà in RFLP alleli.
Una volta localizzato un gene della malattia, condurre analisi RFLP su altri membri della famiglia potrebbe rivelare un corriere dei geni mutanti o segnalare il rischio complessivo della malattia. È importante notare che la tecnica RFLP non è ampiamente utilizzata ora che vengono utilizzate tecniche più nuove e più robuste per l'analisi del DNA nella scienza forense e in molti altri campi.
Aspetti negativi di RFLP
Sfortunatamente, la tecnica di analisi RFLP è noiosa e lenta. Oltre a richiedere una grande quantità di DNA campione, il campione dovrebbe normalmente avere le dimensioni di un quarto, ovvero relativamente grande per i campioni di DNA - il processo, dall'etichettatura della sonda al lavaggio e all'autoradiografia, può richiedere fino a un mese intero completare.
I risultati del progetto Human Genome hanno praticamente sostituito la necessità di RFLP. Il progetto ha permesso di determinare l'intera sequenza del DNA trovato nelle cellule umane, il genoma umano e di identificare tutti i geni nel genoma umano.